Hi ha moltes maneres de mesurar el creixement bacterià i una forma és més complicada que l’altra. Tot i que de vegades s’ha d’ignorar la consistència de la mesura, la forma més senzilla és suficient per mesurar amb exactitud el creixement bacterià, de manera que s’utilitza sovint. Els mètodes més utilitzats són el seguiment i el recompte de bacteris, la mesura de la massa seca o humida i la mesura dels nivells de terbolesa / terbolesa. El laboratori de la vostra escola hauria de disposar de les eines i l’equip necessari per realitzar almenys un d’aquests experiments.
Pas
Mètode 1 de 3: Monitorització de bacteris en viu
Pas 1. Prepareu els ingredients
Hi ha moltes eines especials que cal preparar i que potser no estaran disponibles en un laboratori de biologia. Prepareu tots els equips i contenidors abans d’executar l’experiment per tal que no hi hagi molèsties durant el procés. Haureu de conèixer cada ingredient que s’utilitza de seguida i els termes bàsics d’aquest experiment.
- Prepareu la cambra de comptatge. Té una càmera incorporada, un microscopi de vidre i un microscopi, de manera que és fàcil de configurar i utilitzar. El podeu comprar a un laboratori o a una botiga de material escolar. Aquesta eina hauria de contenir instruccions que us guiaran durant tot el procés.
- Prepareu un got per abocar o untar. Aquests dos contenidors permeten controlar els bacteris que hi ha a l’interior.
- Cultura és un terme que s’utilitza per descriure el creixement d’organismes en un experiment.
- El brou és un medi líquid en què creix el cultiu.
Pas 2. Utilitzeu el mètode de la placa d’abocament o de la placa d’estendre
També podeu col·locar els bacteris directament al plat per visualitzar-los amb un microscopi. Aboqueu el cultiu sobre un plat i poseu-lo al microscopi. Superviseu el nombre de cèl·lules bacterianes presents.
Pas 3. Assegureu-vos que la dosi de concentració sigui correcta
Si n’hi ha massa, els bacteris s’acumularan l’un sobre l’altre i és possible que calculeu malament. Diluïu el cultiu barrejant amb més brou. Si n'hi ha massa poques, els resultats del càlcul no seran precisos. Colar el brou amb un sistema de filtració.
Pas 4. Comptar bacteris
L’últim pas és comptar els bacteris un per un. Mireu a través de la lupa de la cambra de recompte i escriviu el nombre de bacteris que veieu. Compareu els resultats amb els resultats d'altres proves.
Mètode 2 de 3: mesurament de la massa seca i humida
Pas 1. Assegureu-vos que teniu l'equip adequat
Aquest mètode fa servir un equip car i molt de temps. Si el vostre laboratori no disposa de l'equip que necessiteu, és una bona idea utilitzar un altre mètode. Tot i això, si el vostre laboratori està prou equipat, us recomanem aquest mètode, ja que proporciona resultats més consistents. En aquest mètode, necessitareu:
- Forn de convecció per gravetat hidràulic
- Recipient de pesatge fabricat en alumini
- Un joc de matrassos (ampolles de laboratori)
- Màquina centrífuga (centrífuga) o sistema de filtratge de laboratori
Pas 2. Assegureu-vos que el cultiu es troba al matràs
Afegiu el cultiu a la carbassa. En aquesta etapa, el cultiu hauria de ser un brou, tot i que posteriorment es tornarà a separar.
Pas 3. Asseceu el recipient de pesatge d'alumini al forn de laboratori
En lloc d’això, podeu utilitzar una membrana filtrant d’acetat de cel·lulosa amb un diàmetre de 47 mm i una mida de porus de 0,45 µm. Qualsevol que sigui el contenidor de pesatge que utilitzeu, peseu-lo, ja que caldrà deduir-lo més endavant en pesar les cèl·lules bacterianes.
Pas 4. Incorporeu el cultiu al matràs fins que quedi uniformement barrejat
La cèl·lula s’enfonsarà naturalment a causa de la gravetat i caldrà remenar-la per estendre’s uniformement al matràs. D’aquesta manera, podeu obtenir més mostres.
Pas 5. Utilitzeu una centrífuga per separar les cèl·lules bacterianes del brou
Aquesta eina fa girar el matràs i s’equilibra ràpidament de manera que drena el brou i deixa el cultiu al matràs.
Pas 6. Raspeu la pasta de la carbassa i poseu-la en un recipient de pesatge
Llenceu el brou perquè ja no el necessiteu. Tot i així, no desfeu-vos de la carbassa encara perquè encara s’utilitzarà.
Pas 7. Esbandiu la màquina centrífuga i aboqueu l'aigua d'esbandida al recipient
Deixeu caure l’aigua d’esbandida al matràs sobre les cèl·lules bacterianes per obtenir el pes humit.
Pas 8. Trobeu el pes sec
Per mesurar el pes sec, introduïu el recipient al forn i eixugueu-lo a 100ºC durant 6-24 hores segons les instruccions del forn i / o del recipient de pesatge utilitzat. Assegureu-vos que la temperatura no sigui massa alta perquè els bacteris no es cremin. Peseu els bacteris quan hàgiu acabat i no oblideu reduir el resultat pel pes del recipient de pesatge.
Mètode 3 de 3: mesura de la terbolesa
Pas 1. Prepareu l'equip necessari
Necessitareu una font de llum i un espectrofotòmetre. Tots dos es poden obtenir a les botigues de subministraments de laboratori. L'espectrofotòmetre ha de tenir instruccions que us guiaran a utilitzar l'instrument segons el model que tingueu. El preu de l’espectrofotòmetre és bastant assequible i fàcil d’utilitzar, de manera que es pot convertir en un dels mètodes més utilitzats per mesurar el creixement bacterià.
Pas 2. Enceneu la mostra
Segons el terme de Layman, la terbolesa és el nivell de terbolesa d’una mostra. Cal obtenir el número de mesura de la terbolesa, que es mesura en NTU (Nephelometric Turbidity Unit). Cal calibrar aquesta eina abans de poder mesurar la mostra amb precisió.
Pas 3. Registreu els resultats
La terbolesa es veu afectada pel nombre de bacteris de la mostra. L'espectrofotòmetre també us indicarà el percentatge de transmissió (% T). Aquesta xifra augmentarà si disminueix la terbolesa. Compareu els resultats amb els resultats d'altres proves per mesurar el creixement bacterià.
Advertiment
- Com que es tracta d’una colònia bacteriana, preneu precaucions portant equips de seguretat com ulleres de seguretat i guants. També és una bona idea portar una màscara, sobretot si no coneixeu el tipus de bacteris que s’estudia.
- Preneu precaucions abans de manipular qualsevol tipus de bacteri, fins i tot de tipus inofensiu. Assegureu-vos que totes les ferides obertes del cos estiguin completament cobertes abans de començar.
